Chromatographie : analyse et purification

PICT propose un ensemble méthodes de purification et d’analyse de composés biologiques à travers deux plateaux techniques : 

  1. PICT-SPCMIB : pour l’analyse et la caractérisation de molécules : UHPLC-PDA-MS/IC-PDA-MS,  SFC-PDA-MS et MALDI-TOF
  2. PICT-ICEO : pour la séparation et l’analyse de produits de réactions enzymatiques par chromatographie : GC-GC/MS, HPLC/HPAEC & HPLC/HPAEC-MS
    Séparation et analyse de produits de réactions enzymatiques par chromatographie
I. Analyse et caractérisation de molécules (PICT-SPCMIB)

PICT propose un ensemble de services dédiés à la séparation et à la purification de molécules.

Au niveau de PICT-SPCMIB, la plateforme permet de déterminer la pureté d’un échantillon et de l’identifier. La séparation, l’extraction, le suivi de réaction et le dosage de composés chiraux ou non dans un mélange sont réalisables. Les techniques séparatives et d’extraction peuvent se décliner en phase liquide ou en phase supercritique. Le service est doté également d’un spectromètre de masse MALDI couplé à un analyseur TOF qui permet aussi la mesure de la taille de nombreux types de molécules.

Prérequis

Pour toute analyse, il faut au minimum 10 µL de produit à une concentration minimale de 1 mg/mL.

Pour une purification, il faut absolument que le produit à purifier soit soluble dans un solvant organique ou aqueux.

Offre de service

PICT-SPCMIB dispose d’une plateforme de chromatographie complète offrant un panel important de modes de séparation, d’extraction et de purification pour tous mélanges complexes grâce à ses nombreux appareillages et ses phases stationnaires diverses : UHPLC-PDA-MS/IC-PDA-MS & SFC-PDA-MS.

PICT-SPCMIB propose aussi des mesures de tailles par spectrométrie de masse par MALDI-TOF.

Plusieurs types de prestation sont possibles : mise au point/optimisation de séparation, d’extraction ou de purification ; analyse qualitative et quantitative ; caractérisation de composés ; mise à disposition d’appareils après formation.

  • UHPLC-PDA-MS/IC-PDA-MS
  • SFC-PDA-MS
  • MALDI-TOF
UHPLC-PDA-MS/IC-PDA-MS

L’analyse et la purification en chromatographie liquide permettent :

– la séparation des différents composés, molécules ionisables ou ionisées d’un mélange,

– la quantification des composés, molécules ionisables ou ionisées d’un mélange,

– l’identification des composés, molécules ionisables ou ionisées d’un mélange.

Deux types d’analyse ou de purification sont proposés en fonction de la nature ou de la concentration des composés à analyser :

  1.  analyse UHPLC ou purification avec plusieurs modes de détection : PDA, fluorescence, à diffusion de lumière ou masse.
  2.  analyse IC ou purification avec plusieurs modes de détection : PDA, conductimétrie ou masse.

Les purifications peuvent être menées sur plusieurs centaines de mg.

SFC-PDA-MS

L’analyse et la purification en chromatographie supercritique permettent :

– la séparation des différents composés d’un mélange,

– la quantification des composés,

– l’identification des composés.

Les analyses proposées sont fonction de la nature ou de la concentration des composés à analyser avec détection : PDA ou/et masse.

Les purifications sont effectuées pour des composés munis de chromophores avec détection UV. Elles peuvent être menées sur plusieurs centaines de mg.

MALDI-TOF

L’identification de peptides ou de protéines, l’analyse de leur séquence en acides aminés ou encore la mise en évidence de modifications post-traductionnelles peuvent être misent en œuvre par la spectrométrie de masse MALDI-TOF.

Deux modes d’analyse sont proposés en fonction de la nature des composés à analyser :

– mode réflectron pour les molécules de tailles inférieures à 5000 daltons,

– mode linéaire pour les molécules de tailles supérieures à 5000 daltons.

II. Purification et analyse de biomolécules (PICT-ICEO) issues de réaction enzymatique

En lien avec ses activités de synthèse de ligands et de caractérisation d’activité enzymatique, PICT propose un ensemble de services dédiés à la séparation et l’analyse chromatographique de molécules.

Au niveau de PICT-ICEO, les équipements et les savoir-faire disponibles permettent d’analyser les produits de réactions catalysées par les enzymes ingénieurées ou découvertes.

Offre de service

PICT-ICEO dispose d’un plateau analytique complet (GC-GC/MS, HPLC/HPAEC et HPLC/HPAEC-MS) qui offre, par la diversité de ses appareillages et de ses phases stationnaires, une large gamme d’application dans les domaines de la chimie et de la biochimie pour la séparation et le dosage de molécules dans des mélanges complexes. Plusieurs types de prestation sont possibles: mise au point/optimisation de séparation ; analyse qualitative et quantitative ; mise à disposition d’appareils après formation.

  • GC-GC/MS
  • HPLC/HPAEC
  • HPLC/HPAEC-MS
GC-GC/MS

La chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse permet:

– la séparation des différents composés d’un mélange à condition qu’ils soient thermostables et suffisamment volatils,

– la quantification des composés d’un mélange par étalonnage externe,

– l’identification des composés en comparaison avec une base de données.

Deux types d’analyses sont proposés en fonction de la nature ou de la concentration des composés à analyser :

a)  Analyse GC détection en FID,

b)  Analyse GC détection en FID couplée à la spectrométrie de masse MS.

HPLC/HPAEC

L’analyse chromatographique permet :

– la séparation des différents composés d’un mélange

– la quantification des composés d’un mélange par étalonnage externe

– l’identification des composés en comparaison avec une base de données.

Trois types d’analyses sont proposés en fonction de la nature ou de la concentration des composés à analyser :

a)  analyse HPLC détection UV et/ou RI

b)  analyse HPLC avec détection UV-CAD

c)  analyse HPAEC avec détection par ampérométrie pulsée.

HPLC/HPAEC-MS

L’analyse chromatographique couplée à la spectrométrie de masse permet :

– la séparation des différents composés d’un mélange,

– la quantification des composés d’un mélange par étalonnage externe,

– la détermination de la masse molaire des composés.

Deux types d’analyse sont proposés en fonction de la nature ou de la concentration des composés à analyser :

a)  analyse HPLC avec détection UV et/ou RI couplée à la spectrométrie de masse,

b)  analyse HPAEC avec détection par ampérométrie pulsée couplée à la spectrométrie de masse.